高通量基因定量检测服务
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基于MCF技术的高通量基因定量检测服务

本公司最新开发的基于竞争性PCR技术的多重基因定量技术——MCF-PCR技术(Multiplex Competitive Fluorescent-PCR),能够实现在一个PCR反应中完成10-20个基因的定量检测,并能方便实现成千上万例样本的检测,且准确度能和SYBR实时荧光定量PCR技术相媲美。

竞争性PCR是上世纪90年代研发成功的一种PCR技术。虽然该技术是定量准确度最高的PCR技术,但限于当时实验技术条件(如竞争性模板制备和定量困难),未能得到广泛应用。本公司基于现有多种核酸技术,将竞争性PCR技术开发成一种常规的服务项目,实现高通量的精确基因定量。

技术原理

竞争性PCR技术是通过每反应孔中存在相同的竞争性PCR模板来校对PCR管内多重PCR的扩增差异,从而获得可靠的结果。那一段竞争性序列与目标基因序列基本相同,两者用共同引物进行扩增,具备相同的扩增效率,因此PCR终产物的浓度比值反应了起始模板的浓度比值。

 

 

实验流程

实验流程如图所示:包括逆转录,多重竞争性PCR,测序仪电泳分离机数据分析。

 实验结果分析 

 

SYBR实时荧光定量PCR技术比较

 

靶基因的发现:定位克隆QTL区段中功能基因的确定(一般需在较多样本、多个组织中筛选几十个基因)。

生物标记物筛选:如探索肿瘤发病机制时,针对癌症发现途径和人类细胞外基质与粘附因子,研究病变与正常组织中基因表达谱差异,有助于肿瘤的靶向治疗。

毒理研究:如对疾病进行多种药物毒理方面的研究,可监测其疗效与毒副作用,寻找到有效的治疗药物。

信号/代谢通路研究:如细胞凋亡通路的全面研究,需对数十个关键节点基因进行研究。

分子药物筛选的分析: 一种细胞用多种化合物进行筛选时,如果能快速、经济地检测几个信号通路的变化,则可大大加速有效先导化合物的筛选速度。

芯片结果的确认:基因芯片从大量基因中初筛出来的几十种效应基因,可用该平台进一步验证。