实时荧光定量PCR服务
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实时荧光定量PCR服务

技术原理

    实时荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时检测整个PCR进程,最后通过Ct值与标准曲线的处理对未知样本进行定量分析,是最常用的基因表达分析技术。有绝对定量与相对定量两种定量分析方法。

 

 

实验流程

样本的质检

Ø  Nanodrop精准测定,样本消耗量低。

引物设计

Ø  有着多年的经验,比较透彻地掌握这方面的规律。

内参基因的选择

Ø  客户自己提供,我们进行验证;

Ø  我们选择多个内参,进行特定实验优选;

Ø  很据实验或客户需求,可同时进行双内参校正

检测平台

Ø  ABI 750096 well),50ul 标准体系,满足少量实验需求。

Ø  ABI 7900384 well),20ul标准体系,满足大量实验需求,对照设在同板,结果均一。

实验质控

 实验严格分区

Ø  防控污染最有效的方法。

 可靠的数据

Ø  Ct值在18-30间,数据较准确;

Ø  与样本原始浓度、RT效率及PCR效率有关;

Ø  反应效率随设计引物差异而相差几十倍,优化的引物使得实验效率最大化;

Ø  长期实验证实:较长的引物使实验效率显著改进,但易引起非特异,通过实验进一步优化而避免。