支原体检测
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翼和支原体污染检测服务

为什么要做支原体污染检测?

    在细胞研究领域,支原体是臭名昭著的污染源,许多实验室都深受其害。支原体感染能在不知不觉中干扰研究结果,浪费大量的资金投入。

研究表明,95%以上污染细胞的支原体属于以下四种类型:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii,此种支原体为牛源性)。这是四种最常见的污染细胞的支原体菌群,但实际中能够污染细胞的支原体的种类是很多的。国外的调查证明,有二十多种支原体可以污染细胞,并且有的细胞可以同时被两种以上的支原体污染。

支原体一般来自于实验室工作人员,它们很快就能生根,一次小小的疏忽就可能使整个实验室的细胞受到污染。其他许多微生物污染会使培养基变得浑浊,可支原体污染完全是不留痕迹的,而且细胞培养中常用的抗生素都杀不死支原体。

支原体是最小的可体外生长的微生物,可长期与宿主细胞共同生长,不产生急性细胞毒作用,在实验中容易被忽视。目前在细胞培养过程中有70%以上都存在支原体污染的情况。细胞受到支原体污染后不仅会影响细胞内某些基因的表达,也会在一定程度上影响细胞的生长状态。

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为了避免实验进程以及实验结果的准确性,研究人员们应该尽早将研究所涉及的细胞系进行支原体污染检测,从早期解决或规避问题。

翼和支原体检测服务

上海翼和生物提供细胞系支原体污染检测服务,特异性扩增高度保守的支原体16S rRNA序列,可以用于检测非常广泛的支原体种类,并且不会受真核细胞或细菌DNA干扰。

检测流程:

1.客户送样

2.扩增样本制备

3.PCR扩增

4.琼脂糖凝胶电泳

上海翼和生物支原体检测实例:

PCR图

阳性对照应在643bp处有一条带,阴性对照无条带,检测条带在438-470bp区间。

 

送样要求

1.贴壁细胞上清液与细胞沉淀制备

   a) 贴壁细胞上清液制备:在无抗生素及其它抑菌或灭菌物质条件下培养 3 天,汇合度达到90%       左右时,直接吸取  1.0ml 细胞培养上清液移至  1.5ml 离心管中。

    b)贴壁细胞沉淀制备:上述(a)贴壁细胞收取完上清后,加入1ml PBS,使用细胞刮刮取细胞,吸取转移至1.5ml离心管,12000rpm离心沉淀细胞。(如果使用胰酶消化细胞,需要10ml PBS洗三遍后,1ml PBS重悬沉淀,然后转移至1.5ml离心管,12000rpm离心获得细胞沉淀。)

2.悬浮细胞上清液与细胞沉淀制备

   a)悬浮细胞上清液制备:在无抗生素及其它抑菌或灭菌物质条件下培养 3 天,500g离心5min,直接吸取  1.0ml 细胞培养上清液移至  2ml 离心管中。

   b)悬浮细胞沉淀制备:上述(a)吸取上清液后的沉淀,加入1ml PBS重悬沉淀,然后转移至1.5ml离心管,12000rpm离心10min,弃上清,获得细胞沉淀。

邮寄须知

1.包装:寄送离心管,使用封口膜封闭,防止溢出,并放入泡沫保温箱加入冰袋。

2.运输:请尽量使用顺丰快递。

注意事项

1.本检测可检测支原体感染,但是无法从电泳条带区分感染的种属。

2.培养上清中常含有高浓度的PCR抑制剂,可能导致假阴性结果,因此建议检测样本以细胞沉淀为佳。

3.假阴性结果判断方法:在测试反应管中同时加入测试样品和阳性对照样品,观察对照条带是否出现。在阳性对照管出现对照条带的情况下,如果测试反应管的对照条带和检测条带都没有出现,则可判断为PCR反应受到了抑制,即假阴性结果。