AmpGeno全基因组扩增
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AmpGeno全基因组扩增

全基因组扩增背景

全基因组扩增方法是一种增加有限的DNA样本的数量的方法。在法医和基因疾病等研究中,DNA样本的量非常有限,但是又要进行多重分析应用,因此全基因组扩增技术将发挥有效的作用。

AmpGeno全基因组扩增服务

上海翼和生物采用多重置换扩增(MDA)技术,在恒温条件下,对样本全基因组DNA进行高产量和高质量的均匀扩增。上海翼和AmpGeno全基因组扩增技术,可连续合成多达70kbDNA片段,保证高度复制准确性。

基本原理

全基因组扩增主要依赖于Phi29 DNA聚合酶,由于Phi29聚合酶不从基因组DNA模板上解离,使得生成的DNA片段能延长到数十甚至百kb,这个酶具有3’–5’的核酸外切酶校读功能,其错误率比基于Taq DNA聚合酶的方法低百倍。除了具有高保真性,还具有特殊的链置换和连续合成特性。

Phi29 DNA聚合酶消除了DNA的二级结构,因而能够准确并且均匀的扩增基因组序列。使用高度续进性的Phi29 DNA聚合酶得到的长DNA片段,确保了Phi29扩增得到的DNA覆盖了整个基因组,连贯并且无偏地扩增所有遗传位点。

样本要求

全基因组扩增要求模板DNA不能严重降解,以减少因模板量太少而造成等位基因的不平衡扩增。正常情况下,50 µl的反应体系,5ng模板DNA的扩增产物,可稀释后用于后续的DNA分析。

应用实例

全基因组扩增DNA产物适用于

l  二代测序

l  使用芯片进行基因分型检测

l  比较基因组杂交研究(CGH

l  单核苷酸多态性(SNP)基因分型检测

l  Sanger测序

l  STR微卫星分析

l  单体基因分型检测

 

AmpGeno全基因组扩增试剂盒

上海翼和AmpGeno全基因组扩增试剂盒采用多重置换扩增(MDA)技术及Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系,在恒温条件下,实现对DNA复杂结构的解链和复制,可连续合成多达70kbDNA片段,对样本全基因组DNA进行高产量和高质量的均匀扩增。确保了Phi29扩增得到的DNA覆盖了整个基因组,连贯并且无偏地扩增所有遗传位点。

Phi29聚合酶具有不从基因组DNA模板上解离的特性,使得生成的DNA片段能延长到数十甚至百kb,并且该酶具有3’–5’的核酸外切酶校读功能,其错误率比基于Taq DNA聚合酶的方法低百倍。除了具有高保真性,还具有特殊的链置换和连续合成特性。

AmpGeno试剂盒可以实现少量 DNA 样本的全基因组无差别扩增,一个反应可以达到 40μg 的全基因组 DNAAmpGeno要求 DNA 样品不能严重降解,以减少因模板量太少造成不平衡扩增。扩增产物可以稀释后用于后续的 DNA 分析。

 

AmpGeno试剂盒特性

 

AmpGeno试剂盒特性

高覆盖度

经过扩增后可达95%以上覆盖度

高均一度

无偏好扩增,可实现全基因组的均一扩增

高保真

具有很强的校正功能,保真度高

灵敏

可实现极少量样本的全基因组扩增

应用实例

 

 

 

产品包装

产品组成

体积

Phi29 Enzyme

25ul

dNTPs(各10mM

200ul

10 x Buffer

1ml

Primer mixture1mM

20ul

100 x BSA

100ul

ddH2O

1ml

 

全基因组扩增DNA产物适用于

 

l  二代测序

l  使用芯片进行基因分型检测

l  比较基因组杂交研究(CGH

l  单核苷酸多态性(SNP)基因分型检测

l  Sanger测序

l  STR微卫星分析

l  单体基因分型检测