高通量测序超高重PCR建库试剂盒
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高通量测序超高重PCR建库试剂盒

Hi- Primers介绍

精准医学时代,靶向特异区段重测序的需求日益增加,样本量常达上千个,只用传统的Sanger法或目标区域杂交捕获测序价格昂贵。因此基于超高重PCR的扩增子捕获测序应对该区段范围适用性强,针对连续区段,外显子靶标以及客户指定位点,特异设计优化捕获引物,多重PCR一次捕获所有位点,提供预混引物以及反应试剂,方便客户自行实验。

上海翼和生物超高重PCR建库技术,利用自主开发的多重PCR引物设计软件,结合知识密集型的多重PCR优化技术,克服扩增效率不均一问题,保证每个扩增子间拷贝数的均一性(利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物,根据ct值判读产物浓度,确保产物间的均一性)。

使用超高重PCR建库试剂盒Hi- Primers,在建库过程中引物端自动加上区分样本barcode,无需二次建库,两轮PCR完成整个建库过程。试剂盒内容包含:靶向捕获特异性引物Mix,测序平台定制接头,纯化试剂,扩增反应体系等。只需拥有自己的测序平台,Hi- Primers帮您完成建库所有问题。

应用领域:孟德尔遗传性疾病的筛查和诊断,精准医疗研究与应用等。

试剂盒适用测序平台

 

Hi- Primers建库流程示意图

试剂盒定制流程

引物设计:根据客户需求(对连续区段,外显子靶标以及客户指定位点),基于超高重PCR的扩增子捕获测序,利用上海翼和生物自主开发的引物设计软件,设计特异性捕获引物。

引物优化:利用多重PCR引物优化技术,使扩增子间均一性好,保证每个扩增子间拷贝数差异控制在平均深度的5~10倍以内(利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物,根据ct值判读产物浓度,确保产物间的均一性),90%扩增子reads数大于15,不浪费测序通量。

试剂盒组成:试剂盒包含包含从扩增到建库到测序前纯化所用到的所有内容,购买一个试剂盒即可完成整个建库过程。

 

试剂盒内容组成

序列

内容

1

Hi -Primers建库试剂盒操作说明书

2

引物序列信息

3

定量PCR质检报告

4

特异性捕获引物Mix(提供1000 Sample预混引物)

5

上下游标签引物

6

阴性/阳性对照DNA

7

PCR扩增反应体系

 

试剂盒参数

试剂盒参数

 

DNA样本

DNA浓度15ng/ul,浓度5-15ng/ul需提前说明

均一性

95%扩增子测序深度在0.2X平均测序深度以上

覆盖度

100X平均测序深度,100%扩增子覆盖

适用平台

Illumina Hiseq2500MiseqX10等主流测序平台

平均扩增子长度

200bp(游离DNA<150bp

 

翼和特色

内容

定量PCR质控结果

覆盖度均一性

 

试剂盒实验流程